微滴数字PCR技术动态监测非小细胞癌患者血浆游离DNA EGFR基因突变

摘要

背景:肺癌一直以来都位居全球癌症相关死亡的首位。近年来，表皮细胞生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制物(TKIs)被证明对具有EGFR激活突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者具有显著疗效。然而，几乎所有初始时对EGFR-TKI反应良好的患者会在6-12个月内出现获得性耐药。因此，治疗前进行EGFR突变检测筛选具备EGFR-TKIs治疗指征的患者，治疗中持续监测EGFR突变状态的变化，及时发现耐药突变改变治疗策略，对延长NSCLC患者的生存及预测预后有重要意义。近些年血浆游离DNA(cfDNA)被认为是一种可能的、代替肿瘤组织用来检测肿瘤特异性改变的样本。cfDNA应用于临床EGFR基因突变检测依赖于高灵敏度的EGFR基因突变检测技术的发展，而Droplet digital PCR(ddPCR)是一种新型的PCR技术，具有更高的精度、重复性和灵敏度，并且可以实现突变基因的定量检测。
　　目的:本研究应用ddPCR技术定量监测NSCLC患者血浆cfDNA EGFRE19-Dels、L858R及T790M突变，分析检测结果与患者对厄洛替尼治疗反应的相关性，从而探讨ddPCR技术检测cfDNA EGFR基因突变应用于服用EGFR-TKIs的NSCLC患者随访及预测预后的可行性。
　　方法:1、收集2011年1月-2015年5月北京协和医院呼吸内科肺癌中心门诊就诊服用厄洛替尼的非小细胞肺癌患者4ml全血标本（厄洛替尼治疗前、厄洛替尼治疗中、厄洛替尼疾病进展后），共50人，66份血标本，其中厄洛替尼治疗前血标本19份、治疗中血标本36份，疾病进展后血标本11份。通过ddPCR技术检测血浆中cfDNA EGFR E19-Dels、L858R及T790M突变，与组织对比，计算血浆EGFR基因突变检测灵敏度和特异度，并分析检测结果与患者临床对厄洛替尼治疗反应的相关性。2、回顾分析2007年5月-2015年4月158例北京协和医院呼吸内科肺癌中心门诊就诊曾接受过厄洛替尼治疗的非小细胞肺癌患者的临床资料。将患者根据EGFR突变类型分为E19-Dels和E21L858R两组，比较两组患者服用厄洛替尼后PFS、OS是否有差异，获得EGFR突变阴性患者使用厄洛替尼的生存曲线。
　　结果:1、将组织EGFR突变检测(ARMS法)作为金标准，ddPCR检测血浆E19-Dels和L858R的灵敏度为41.30％(19/46)，特异度为88.89％(8/9)。与临床资料结合，9例患者中8例血浆EGFR突变状态变化趋势与患者临床对厄洛替尼的治疗反应相符，仅1例不符。厄洛替尼治疗过程中血浆3例检测出T790M突变阳性，分别出现在根据RECIST判定为疾病进展前8周、18周及3周。50％(6/12)使用厄洛替尼疾病进展后血浆检测出T790M突变阳性。2、将把EGFR-TKIs作为一线治疗的EGFR基因突变阳性患者分为E19-Dels(+)组13人和L858R(+)组13人，E19-Del(+)组中位PFS为142周，L858R(+)组中位PFS为97周，二者无显著统计学差异（P=0.113）。21例EGFR基因突变阴性接受厄洛替尼治疗的患者中位PFS为20周，中位OS为51周，8周疾病控制率为52.4％。
　　结论:使用ddPCR技术检测血浆cfDNA EGFR基因突变提供了一个无创、快捷、定量动态监测非小细胞肺癌患者EGFR基因突变状态的方法。这一技术不仅可以监测EGFR敏感突变的突变率变化，还可以及时检测出耐药突变的出现，对肺癌的治疗和预后具有重要的指导意义。

目录

英文缩略语

摘要

引言

1．材料与方法

1．1 研究对象

1．2 临床资料采集

1．3 试剂及主要仪器

1．4 样本采集、分离血浆

1．5 提取血浆cfDNA

1．6 ddPcR技术检测血浆cfDNA EGFR E19-Dels、L858R、T790M突变

1．7 数据分析

2．结果

2．1 患者基本临床特征

2．2 应用ddPCR技术进行血浆cfDNA EGFR基因突变检测

2．3 对158例曾接受过厄洛替尼治疗的非小细胞肺癌患者的生存分析

3．讨论

3．1 应用ddPCR技术进行血浆cfDNA EGFR基因突变检测

3．2 对158例曾接受过厄洛替尼治疗的非小细胞肺癌患者的生存分析

参考文献

对非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药机制的探究

附录

致谢

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