艾滋病模型中关键指标SIV DNA绝对定量微滴式数字PCR技术的创新应用

摘要

目的建立微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR,ddPCR)作为关键指标,实现精准检测艾滋病动物模型中细胞及组织中SIV DNA载量,用于储存库隐匿病毒实时动态评估。方法根据成熟的qPCR方法,对微滴式dPCR的反应条件进行了优化,确定最适退火温度;通过对10倍系列稀释pGEM-SIVgag477质粒标准品的检测,确定ddPCR检测范围。并通过对若干DNA样品的多次检测,判断该检测方法的稳定性。结果ddPCR的退火温度为60℃;检测范围是0.3~3.96×104 copies/μL;微滴式dPCR与qPCR有良好的相关性,相关系数r=0.9981。结论本研究建立了基于微滴式dPCR的SIV病毒DNA的绝对定量方法,可有效的对细胞和组织中病毒储存库样本中病毒DNA载量进行动态绝对定量,极大提高了模型应用评价的准确度。