HCV NS3 N端多肽诱导人肝细胞系转化及成瘤实验

摘要

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构区3 N端多肽(HCV NS3-5′)对人肝细胞株QSG7701的转化作用及致癌性.方法通过脂质体介导将含有HCV NS3 N端cDNA的真核表达质粒(pRcHCNS3-5′)导入人源性肝细胞株QSG7701,G418筛选目的基因表达的细胞;聚合酶链反应(PCR)及免疫组织化学SP法检测细胞中HCV NS3基因及蛋白的表达;细胞计数,锚着非依赖性生长实验,成瘤性检测等鉴定其生物学行为变化,免疫组织化学S-P法检测所致肿瘤中HCV NS3及c-myc蛋白表达.结果 HCV NS3-5′转染的QSG7701细胞中NS3蛋白过度表达于胞质,质粒pRcHCNS3-5′转染细胞的倍增时间较pRcCMV转染细胞和未转染QSG7701细胞明显缩短(分别为12 h,26 h,28 h).pRcHCNS3-5′和pRcCMV转染细胞及未转染QSG7701在软琼脂中的克隆形成率分别为33.0%、1.5%、1.1%.pRcHCNS3-5′转染细胞的克隆率高于其他两种转染细胞(P<0.01).三种细胞接种裸鼠后, pRcHCNS3-5′转染细胞注射组出现肿瘤,为肝细胞癌,肿瘤组织有HCV NS3蛋白和c-myc蛋白的表达.阳性对照组亦出现肿瘤,而pRcCMV转染细胞及未转染QSG7701细胞注射组在注射40 d后仍未见肿瘤发生.结论 HCV NS3 N端蛋白具有转化细胞和促进肿瘤发生的作用.