人胶质瘤干细胞趋化因子受体CXCR4活化促进血管生成的作用

摘要

目的从人恶性胶质瘤细胞系 U87中分离、培养和鉴定胶质瘤干细胞,观测其 CXCR4表达情况及其活化后促血管生成因子分泌的变化。方法通过流式细胞术检测 U87细胞中 CD133阳性细胞的比例。使用 CD133免疫磁珠分离试剂盒通过磁性细胞分选系统分离胶质瘤干细胞。采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测胶质瘤干细胞中神经巢蛋白（nestin）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、趋化因子受体 CXCR4的表达;以 CXCR4配体刺激通过钙流试验检测受体功能,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清中血管内皮生长因子（VEGF）和白细胞介素-8（IL-8）的含量。建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察胶质瘤干细胞成瘤情况及瘤体内 VEGF 表达情况。结果U87细胞系中 CD133阳性细胞的比例为0.5%,这些细胞具有干细胞增殖和生长特性;它们表达CXCR4,用其相应配体激活后导致胞内钙流增加、分泌 VEGF 和 IL-8增多。与 CD133阴性细胞相比,CD133阳性细胞在体外分泌 VEGF、IL-8多,在体内成瘤率高,形成的移植瘤生长迅速,表达更多VEGF。结论人恶性胶质细胞瘤细胞系 U87中含有极少量胶质瘤干细胞,表达功能性 CXCR4、分泌更多促血管生成因子,提示这些干细胞也直接参与胶质瘤血管生成。