功能化单壁碳纳米管/NR2B-shRNA干扰质粒复合物的制备及其用于慢性疼痛的基因治疗

摘要

目的:评价鞘内注射功能化单壁碳纳米管shRNA干扰质粒复合物对福尔马林炎性痛小鼠的基因沉默效果.方法:先将整合了NR2B目的基因的pYr-1.1-hU6-EGFP(带绿色荧光)质粒进行扩增,抽提,消毒浓缩,浓度纯度测定,以获得高纯度、高浓度的NR2B-shRNA干扰质粒；将难溶于水的单壁碳纳米管用表面活性剂十六浣基三甲基溴化铵(CTAB)和超声振荡法制备成功能化单壁碳纳米管(f-SWNT)混悬液,通过凝胶成像系统检测功能化单壁碳纳米管与NR2B-shRNA的结合情况;选取雄性清洁级成年C57BL/6小鼠40只,体重18 ～ 23 kg,随机分为5组(n=8)∶空白组(C组),假手术组(S组),实验组(A组),阳性对照组(P组),阴性对照组(N组)；分别行鞘内注射,7天后建立福尔马林炎性痛小鼠模型,测定术后lh自发痛行为学改变,职脊髓L4～6节段采用RT-PCR法检测NR2BmRNA表达.结果:获得能够稳定表达的NR2B-shRNA干扰质粒；表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)修饰单壁碳纳米管能形成较稳定的功能化单壁碳纳米管混悬液；功能化单壁碳纳米管能与NR2B-shRNA干扰质粒很好地结合,其结合最佳质量比为1∶3.5；对于福尔马林所致的Ⅰ相急性痛,所有组间的急性期伤害性反应无差别(P＞0.05),阳性对照组(P组)和实验组(A组)小鼠对福尔马林所致的Ⅱ相持续痛的伤害性反应显著降低(P＜ 0.02)；阳性对照组(P组)和实验组(A组)小鼠脊髓NR2BmRNA表达均低于其他对照组(P＜0.05).结论:功能化单壁碳纳米管能与NR2B-shRNA干扰质粒很好地结合形成功能化单壁碳纳米管/NR2B-shRNA干扰质粒复合物；鞘内注射功能化单壁碳纳米管用作基因载体能有效转染NR2B-shRNA干扰质粒复合物行NR2B基因沉默,抑制小鼠脊髓NR2B基因表达,减轻福尔马林Ⅱ相痛行为学.