不同剂量、多疗程地塞米松对大鼠成骨细胞生物活性及Wnt信号通路的影响

摘要

目的 研究不同剂量、多疗程地塞米松对大鼠成骨细胞生物活性及Wnt信号通路的影响,以进一步探讨Wnt信号通路在皮质激素性骨质疏松的作用.方法 用改良组织法培养大鼠颅骨成骨细胞,采用倒置相差显微镜及碱性磷酸酶染色法观察成骨细胞形态,将大鼠成骨细胞分为四组,分别用含不同浓度的地塞米松(0 mol/L、10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6mol/L)的DMEM(H)培养基培养,于作用后6h、12h、24 h、48 h,采用RT-PCR检测Wnt信号转导途径中Wnt7b、LRP 5、LRP 6、β-catenin基因mRNA表达及Wnt通路抑制因子DKK-1基因mRNA表达；于作用后ld、2d、3d、5d、7d,采用MTS法检测地塞米松对成骨细胞增殖的影响；于作用后21 d,采用茜素红钙结节染色及油红O染色,观察地塞米松对成骨细胞成骨及成脂活性的影响.结果 与地塞米松0 mmol/L组对比,在浓度10-6 mmol/L、10-7 mol/L的地塞米松作用下,成骨细胞的成脂活性增强,胞浆中出现大量脂滴,成骨细胞的增殖、骨形成活性明显受到抑制；RT-PCR结果显示地塞米松10-6 mmol/L、10-7 mol/L组Wnt7b(32.01 ±0.01、31.71±0.04)、LRP 5(23.28±0.12、23.31±0.10)、LRP 6(23.03±0.18、22.31±0.54)及β-catenin基因mRNA的表达量(30.78±0.42、29.14±0.82)均显著低于0mmol/L组(Wnt7b:33.04±0.19,LRP5:23.99±0.36,LRP6:25.15 ±0.05,β-catenin:32.49±0.45)(P＜0.05),抑制因子DKK-1基因mRNA(26.14±0.48、25.46 ±0.64)表达量显著高于0mmol/L组(22.18±0.82)(P＜0.01),且地塞米松作用时间越长,上述改变越明显.结论 长期、大剂量应用糖皮质激素可通过升高DKK-1的表达抑制成骨细胞的Wnt信号通路,从而抑制成骨细胞增殖,促进成骨细胞脂肪化,进而抑制成骨细胞的骨形成活性,这可能在皮质激素性骨质疏松中发挥重要的作用.