阿托伐他汀钙对原代成骨细胞OPG、RANKL、M-CSF基因表达的影响

摘要

目的 观察不同浓度阿托伐他汀钙对体外培养原代成骨细胞增生和对OPG、RANKL、M-CSF基因表达的影响,探讨阿托伐他汀钙抗骨质疏松的分子机制,为临床用药提供实验依据.方法 采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞；采用差速贴壁法进行纯化.光镜下观察细胞的形态结构和生长状况,通过碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化SABC法对细胞进行鉴定.用不同浓度的阿托伐他汀钙(10-9、10-8、10-7、10-6和10-5 mol/L)干预成骨细胞,在24、48和72 h后,用实时荧光定量方法检测OPGmRNA、RANKL mRNA、M-CSF mRNA的表达水平.结果 镜下观察显示细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角、多边、长梭等形态,并伸有粗大伪足；碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性.实时荧光定量PCR结果显示:不同浓度的阿托伐他汀钙(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)均可以促进OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,对M-CSF mRNA基因的表达也具有促进作用,且与药物浓度及作用时间有关.结论 采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法体外分离成骨细胞,采用多次“差速贴壁法”可以获得数量多、纯度高且活性好的成骨细胞.阿托伐他汀钙可以促进成骨细胞OPG基因mRNA的表达,抑制RANKL基因mRNA的表达,对M-CSF基因的表达也有一定的促进作用.