重组VEGF165质粒对骨缺损修复的影响

摘要

目的 构建pcDNA3.1-VEGF165质粒,观察其对骨缺损修复的影响.方法 用Trizol法提取兔骨组织中总RNA,反转录合成VEGF165 cDNA序列,与 pMD18-T构建真核表达载体,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165.取28只新西兰大白兔制备双侧桡骨骨缺损(10mm)模型.实验侧局部直接注射质粒液0.2ml(含质粒200ng),对照侧注射等量生理盐水.标本于术后1、2、4、6、8和12周摄X线片后取材.以HE染色法、免疫组化染色法观察局部组织的修复情况及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达.结果 pcDNA3.1-VEGF165构建成功,测序正确.X线摄片观察于第2周开始两组出现区别.HE染色显示术后2周两组缺损区组织炎性细胞浸润;4周开始实验组成骨细胞大量增殖、骨小梁形成;12周时实验组骨缺损修复正常,对照组修复时间迟缓.免疫组化结果显示,术后8周及12周两组Ⅲ型胶原及Ⅰ型胶原均有阳性表达,实验组表达较强.结论 应用pcDNA3.1-VEGF165质粒直接转染骨缺损局部组织细胞,具有增加局部Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达、加快骨缺损修复的作用.