tPA和VEGF165基因共表达质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

摘要

目的　构建携带人组织纤溶酶原激活物 (t PA)和血管内皮细胞生长因子 16 5 (VEGF16 5 )基因的真核表达质粒 p Bud CE4 .1/ t PA - VEGF16 5 ,并观察其在血管平滑肌细胞 (VSMC)中的表达。方法　从人心脏组织中克隆 t PA和 VEGF16 5基因。将 t PA和 VEGF16 5基因克隆至真核表达质粒 p Bud CE4 .1中 ,构建共表达质粒 p Bud-CE4 .1/ t PA - VEGF16 5。将 p Bud CE4 .1/ t PA- VEGF16 5转染 VSMC,用 RT- PCR法检测转染的 VSMC中 t PA和VEGF16 5 m RNA的表达 ,用 EL ISA法检测转染的 VSMC培养液中 t PA和 VEGF16 5蛋白质。结果　人 t PA和VEGF16 5基因的 RT- PCR产物分别为 1.9kb和 5 76 bp。经酶切鉴定证实 ,t PA和 VEGF16 5基因已克隆至真核表达质粒 p Bud CE4 .1中。以其转染 VSMC后 ,经 RT- PCR和 EL ISA检测发现 ,t PA和 VEGF16 5在 m RNA和蛋白质水平均有表达。结论　成功地构建了真核共表达质粒 p Bud CE4 .1/ t PA- VEGF16 5 ,并在 VSMC中表达 t PA和VEGF16 5。