可诱导共刺激分子与人IgG Fc融合蛋白诱导同种免疫低应答的体内外实验

摘要

目的探讨真核表达人可诱导共刺激分子（ICOS）与人IgG Fc融合蛋白（ICOS-Ig融合蛋白）在体内外对同种免疫应答的影响。方法构建ICOS-Ig融合蛋白表达载体,在CHO细胞中表达并纯化ICOS-Ig融合蛋白。以Balb/c小鼠脾细胞为反应细胞,经Co60照射灭活的C57BL/6小鼠脾细胞为刺激细胞,进行初次混合淋巴细胞反应（MLR）,MLR体系中分别加入50 μg/ml ICOS-Ig融合蛋白（ICOS-Ig组）或对照IgG（IgG组）,采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）掺入法检测反应细胞的增殖情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中白细胞介素（IL）2、4、10以及γ干扰素（IFN-γ）的含量。收集初次MLR细胞,与灭活的C57BL/6小鼠脾细胞或C3H小鼠睥细胞共培养,进行再次MLR,检测指标同初次MIR。以Co60照射Balb/c小鼠,经尾静脉输注用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）标记的C57BL/6小鼠睥细胞,每天腹腔注射ICOS-Ig融合蛋白0.2 mg（ICOS-Ig组）、IgG（对照IgG组）或环孢素A（CsA组）,3d后取Balb/c小鼠脾细胞,流式细胞仪测定CFSE荧光强度以判断同种T淋巴细胞的体内增殖情况。结果初次MLR显示,ICOS-Ig组同种T淋巴细胞活化增殖的抑制率为（58±8）%,其培养上清液中IFN-γ的水平明显高于IgG组（P＜0.05）。再次MLR显示,ICOS-Ig融合蛋白能特异性抑制C57BL/6小鼠脾细胞所致的细胞增殖,抑制率为（42±8）%,IL-4和IL-10的分泌受到抑制,而IFN-γ的分泌增加;ICOS-Ig融合蛋白并不抑制第三方细胞所致的细胞增殖。体内实验显示,ICOS-Ig组和CsA组的CFSE荧光强度明显强于空白对照组和对照IgG组（P＜0.05）,而联合处理组CFSE荧光强度强于ICOS-Ig组和CsA组（P＜0.05）。结论 ICOS-Ig融合蛋白在体内外均可抑制同种T淋巴细胞的活化增殖,且这种作用具有特异性。