单纯疱疹病毒Ⅰ型截短糖蛋白B基因序列的克隆及鉴定

摘要

目的 构建单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus Ⅰ,HSV-Ⅰ)SM44株截短塘蛋白B基因序列,为研制联合基因疫苗奠定基础,用于角膜炎的防治.方法 利用聚合酶链反应(polymerase chain response,PCR)技术从感染HSV-Ⅰ SM44株的vero细胞中扩增出HSV-gBt编码基因,经双酶切鉴定后将目的 基因定向插入真核表达质粒pcDNA3,载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA3-gBt,并对其进行酶切分析和测序鉴定.结果 对peDNA3-gBt双酶切后,电泳可见目的 基因(1.5 kb)和线性质粒pcDNA3(5.4 kb)两条带;测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与基因库中登录的HSV-1 F株gB基因序列比较,同源性达99.5%.结论 经证实成功地构建了重组真核表达质粒pcDNA3-gBt,为进一步研究其免疫学效应及构建病毒糖蛋白联合疫苗并最终用于单疱病毒角膜炎的预防和治疗奠定理论基础(中国眼耳鼻喉科杂志,2009,9:11-13)