Galectin-4调控PD-L1影响CD8^(+)T细胞杀伤肝癌细胞的功能

摘要

目的 探讨人半乳糖凝集素4(Galectin-4,Gal-4)影响CD8^(+)T细胞杀伤肝癌细胞的功能及机制。方法 提取并鉴定人外周血CD8^(+)T细胞及树突状细胞(dendritic cells,DC)。选取人正常肝细胞WRL68和肝癌细胞HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Huh-7,并利用Western blot法检测Gal-4蛋白的表达。利用Lipofectamine 3000试剂在肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中转染Gal-4 siRNA及其阴性对照(si-Gal-4组和si-NC组),si-Gal-4组和si-NC组HepG2和SMMC-7721细胞分别与被DC细胞活化的CD8^(+)T细胞共孵育18 h,依次记为si-Gal-4/HepG2+CD8^(+)T组、si-NC/HepG2+CD8^(+)T组、si-Gal-4/SMMC-7721+CD8^(+)T组、si-NC/SMMC-7721+CD8^(+)T组。采用细胞毒性实验检测CD8^(+)T细胞对各组肿瘤细胞的杀伤能力,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组细胞上清液中干扰素(interferon-γ,INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的浓度,Western blot法检测各组肿瘤细胞中PD-L1蛋白的表达。结果 相比于正常肝细胞WRL68,肝癌细胞HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Huh-7中Gal-4蛋白表达水平均显著上调(均P<0.001);相比于si-NC/HepG2+CD8^(+)T组或si-NC/SMMC-7721+CD8^(+)T组,si-Gal-4/HepG2+CD8^(+)T组和si-Gal-4/SMMC-7721+CD8^(+)T组CD8^(+)T细胞杀伤能力均显著增加(均P<0.001),且抑制Gal-4表达后,共培养体系中INF-γ和TNF-α的浓度均显著增加(均P<0.001)。相比于si-NC组,si-Gal-4组HepG2和SMMC-7721细胞PD-L1蛋白表达显著下调(P<0.001)。结论 Gal-4在肝癌细胞中高表达,抑制Gal-4可能下调肝癌细胞PD-L1的表达,进而促进CD8^(+)T细胞的杀伤能力。