circRNA-1565抑制CD8^(+)T细胞对宫颈癌细胞的杀伤功能研究

摘要

目的:探究circRNA-1565对CD8^(+)T细胞的作用及其对宫颈癌细胞杀伤能力的影响。方法:磁珠分选并用流式细胞术鉴定CD8^(+)T细胞。所得CD8^(+)T细胞分为Control组(转染空白质粒)和circRNA-1565组(转染circRNA-1565质粒)。CCK-8和流式细胞术检测Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力和凋亡水平,Western blot检测Control组和circRNA-1565组CD8+T细胞Bcl-2、Bax和cleaved-caspase-3表达。将HeLa和SiHa细胞分别与Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞共孵育(HeLa+CD8^(+)T+Vector组、HeLa+CD8+T+circRNA-1565组、SiHa+CD8^(+)T+Vector组、SiHa+CD8+T+circRNA-1565组),检测各组CD8^(+)T细胞对HeLa和SiHa细胞的杀伤能力,ELISA检测共孵育后各组CD8^(+)T细胞分泌TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin的能力。结果:磁珠分选的人PBMC CD8^(+)T细胞阳性率>88%。相比于Control组,circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力显著下降(P<0.001),细胞凋亡显著增加(P<0.001),Bcl-2和Bax表达显著降低(P<0.001),cleaved-caspase-3表达显著增加。相比于HeLa+CD8+T+Vector组和SiHa+CD8^(+)T+Vector组,HeLa+CD8^(+)T+circRNA-1565组以及SiHa+CD8^(+)T+circRNA-1565组细胞上清中TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin浓度均显著降低(P<0.001),对Hela和SiHa细胞杀伤能力显著降低(P<0.001)。结论:circRNA-1565调控CD8^(+)T细胞增殖和凋亡从而抑制其对宫颈癌细胞的杀伤能力。