逆转录病毒及睫状神经营养因子联合诱导成人视网膜色素上皮细胞转分化成为神经细胞

摘要

目的 观察逆转录病毒及睫状神经营养因子(CNTF)诱导的成人视网膜色素上皮(RPE)细胞转分化过程中的形态特征与标志物变化.方法 成人RPE细胞经携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒感染后,进一步用脂质体介导CNTF表达质粒进行转染.倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,酶联免疫吸附实验、免疫组织化学染色及Western blotting方法检测细胞产生和分泌CNTF的能力、CNTF受体(CNTFR)、多种神经细胞标志物及信号传导分子一类蛋白酪氨酸激酶(JAK)的表达水平.结果 体外培养的成人RPE细胞经GFP逆转录病毒感染后,RPE细胞的形态无明显变化,但开始表达神经元和胶质细胞的某些标志物,如神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP);经CNTF表达质粒转染后,持续高水平表达CNTF的RPE细胞出现明显的神经细胞分化,CNTFR的表达量虽无明显变化,但其分布发生改变,主要分布在细胞膜上;此外,信号传导分子JAK表达明显上调.结论 体外培养的成人RPE细胞在逆转录病毒及CNTF的影响下可出现明显的神经细胞形态分化,转分化与CNTF-CNTFR-JAK信号传导通路有关.