缺氧诱导因子-1α小干扰RNA对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子mRNA抑制作用的动态观察

摘要

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）特异性小干扰RNA（siRNA）对糖尿病大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达的抑制作用。方法随机对照研究。以pSilencer 2.1-U6neo为质粒载体,构建HIF-1αsiRNA重组质粒。雄性Sprague-Dawley大鼠54只,随机分为正常对照组和实验组,分别为15、39只大鼠。实验组大鼠尾静脉注射链尿佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病动物模型,再分为糖尿病模型组、空载体组和基因治疗组,分别为15、12、12只大鼠。脂质体LipofectamineTM2000介导,空载体组和基因治疗组分别转染pSilencer空载体质粒和HIF-1αsiRNA重组质粒,糖尿病模型组和正常组对照组不做转染。采用实时逆转录（RT）-聚合酶链式反应（PCR）检测各组大鼠VEGF mRNA的表达。分别于干扰后24、48、72 h,1周时计算VEGF mRNA的抑制效率。采用单因素方差分析和LSD-t检验进行统计学分析。结果 HIF-1αsiRNA重组质粒经酶切、测序鉴定,确定为目的 序列。实时RT-PCR检测结果显示,正常对照组仅见弱的VEGF mRNA表达,糖尿病模型组及空载体组表达明显上调,基因治疗组表达下调;各时间点空载体组与糖尿病模型组比较,差异无统计学意义（t=0.669,0.142,0.151,0.025;P=0.514,0.889,0.882,0.980）,基因治疗组较糖尿病模型组及空载体组表达下调,差异有统计学意义（t=8.768、13.695、11.285、8.253,t=9.437、13.554、11.436、8.228;P值均=0.000）;VEGF mRNA抑制率24、48、72 h和1周时分别为32.76%、43.60%、47.70%、50.86%。结论 HIF-1αsiRNA重组质粒能有效抑制糖尿病大鼠视网膜中VEGFmRNA的表达。