糖尿病视网膜病变患者血清中微小RNA-195表达结果检测

摘要

目的观察糖尿病视网膜病变（DR）患者血清中微小RNA（miRNA）-195（miR-195）的表达。方法抽取DR患者、糖尿病（DM）患者及正常受检者静脉血5ml,提取血浆总RNA,纯化。通过基因芯片筛选出在DR患者血清中具有差异表达的miRNA,并采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证基因芯片检测结果。采用生物信息学预测miRNA调控的潜在靶基因,筛选出miR-195及其靶基因高迁移率族蛋白B1（HMGB1）。将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）转染miR-195抑制物和（或）miR-195模拟物,建立miR-195高表达和低表达细胞模型,分为空白对照组、高表达（或）低表达组、阴性对照组。采用实时定量RT-PCR检测转染后细胞中HMGB1mRNA的相对表达比率。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测转染后细胞中HMGB1蛋白的表达。结果基因芯片检测结果显示,DR组miR-195表达较DM组下调8.34倍,较正常组下调11.47倍。RT-PCR验证结果与基因芯片检测结果相符。与DM组（F=0.034,t=8.057）和正常组（F=0.370,t=9.522）比较,DR组miR-195表达均明显减弱,差异均有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR检测结果显示,高表达组HUVEC的HMGB1mRNA表达较空白对照组（F=0.023,t=11.287）和阴性对照组（F=0.365,t=7.471）明显下调,差异有统计学意义（P＜0.05）;低表达组HUVEC的HMGB1mRNA表达较空白对照组（F=0.053,t=10.871）和阴性对照组（F=0.492,t=6.883）明显上调,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blot检测结果显示,高表达组HUVEC的HMGB1蛋白表达较空白对照组（F=0.021,t=8.820）、阴性对照组（F=0.039,t=7.401）明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;低表达组HUVEC的HMGB1蛋白表达较空白对照组（F=0.186,t=10.092）、阴性对照组（F=0.017,t=12.923）明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 DR患者血清中miR-195表达明显下调。