半乳糖凝集素-1抑制剂OTX008对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的抑制作用

摘要

目的观察半乳糖凝集素-1（Galectin-1）特异性抑制剂OTX008对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管（RNV）的抑制作用,并探讨其作用机制。方法 7日龄C57BL/6J小鼠128只采用随机数字表法随机分为正常组、单纯模型组、OTX008干预组和磷酸盐缓冲液（PBS）空白对照组,每组32只。正常组小鼠在正常氧环境下饲养;其余3组小鼠建立氧诱导视网膜病变模型。小鼠12日龄时,OTX008干预组小鼠双眼按0.25μg/μl的剂量玻璃体腔注射OTX008 1μl,PBS空白对照组注射等体积PBS。正常组及单纯模型组小鼠不做其他任何干预和处理。小鼠17日龄时,各组作视网膜冰冻切片并行免疫荧光染色,定性观察Galectin-1蛋白的分布情况;作视网膜组织石蜡切片并行苏木精-伊红染色,计数突破内界膜的血管内皮细胞核;作全视网膜铺片并行免疫荧光染色,观察视网膜血管变化并统计RNV区、无灌注区、缺氧区面积;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Galectin-1、神经纤毛蛋白质-1（Neuropilin-1）、磷酸化血管内皮生长因子受体2（p VEGFR2）的蛋白相对表达量。结果与正常组比较,单纯模型组、PBS空白对照组小鼠视网膜Galectin-1蛋白荧光在视网膜神经节细胞层、内丛状层及内核层明显增强;OTX008干预组小鼠视网膜Galectin-1蛋白荧光较单纯模型组、PBS空白对照组明显减弱。单纯模型组、PBS空白对照组小鼠视网膜中突破内界膜的血管内皮细胞核计数较正常组明显增加,差异有统计学意义（t=9.314,P＜0.05）;OTX008干预组小鼠视网膜中突破内界膜的血管内皮细胞核计数较单纯模型组、PBS空白对照组明显下降,差异有统计学意义（t=8.038、7.774,P＜0.05）。与单纯模型组、PBS空白对照组比较,OTX008干预组小鼠RNV区（t=13.250、12.570）、无灌注区（t=15.590、12.430）和缺氧区（t=9.542、9.928）面积明显减小,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blot检测结果显示,与单纯模型组及PBS空白对照组相比,OTX008干预组小鼠视网膜Galectin-1（t=24.800、23.060）、Neuropilin-1（t=4.120、3.530）、p VEGFR2（t=25.880、15.480）蛋白相对表达量明显下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Galectin-1特异性抑制剂OTX008可抑制氧诱导RNV形成,降低视网膜组织缺氧。其机制可能与抑制Galectin-1表达,减少Galectin-1与Neuropilin-1结合,降低pVEGFR2表达有关。