35S标记重组人GAD65抗原检测糖尿病患者GAD-Ab指数

摘要

目的建立一种新的谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)检测方法.方法采用重组人GAD65 质粒,经试管内转录与翻译,获得35S-GAD65抗原,35S-GAD65与血清在自制旋转孵育器上旋转保温,以蛋白质A-琼脂糖作为沉淀剂,用计数仪测沉淀物放射性计数,以GAD-Ab指数>0.05作为阳性标准,并检测43例1型和226例2型糖尿病患者,以及109例正常对照者的GAD-Ab水平.结果检测条件优化:采用SJ1515型35S-蛋氨酸进行试管内转录与翻译,自制旋转孵育器转速控制在20～30 r/ min,操作环境温度为4～25 ℃,缓冲液最佳pH值为7.2～7.4,且新配制使用不宜超过2周,以及采用水平转头离心机等.该方法批内变异系数(CV)为4.9%～8.3%,批间CV为7.1%～10.8%,特异性为98.2%,结果与国际标准化实验室GAD-Ab检测一致率98.3%,Kappa值0.971,优于原放射配位体法.该方法检测1型糖尿病患者阳性率为58.1%(25/43例),2型糖尿病患者为10.2%(23/226例),对照组为1.8%(2/109例),差异均有显著性(P<0.001).结论该方法检测GAD-Ab灵敏、特异性强、重复性好,可望得到广泛应用.