不同分子量枸杞多糖对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

摘要

目的:研究不同分子量枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用.方法:本研究通过水提醇沉及柱分离法以获得不同分子量的LBP成分.运用CCK8法检测不同给药浓度的LBP对RAW 264.7细胞增殖的影响;采用中性红吞噬实验测定LBP对细胞吞噬能力的影响;采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1 β和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达情况,采用Western Blot法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相应蛋白质的磷酸化水平.结果:通过分离纯化获得2个高纯度均一组分,分别为LBP1[重均分子量(Mw)=1207 kDa]和LBP2(Mw=125 kDa).与对照组相比,不同浓度的LBP1和LBP2组分对巨噬细胞的增殖和吞噬能力均有明显的促进作用(P ＜0.05);LBP1和LBP2在50～ 200 μg· mL-浓度范围内,可促进巨噬细胞中TNF-α,IL-1β,IL-6和iNOS mRNA的表达,且呈现剂量依赖性.Western Blot法测定结果显示LBP1和LBP2诱导RAW264.7细胞产生免疫应答与特异性激活JNK MAPK通路相关.此外,在对RAW264.7细胞的刺激作用基础上,LBP1的调节作用明显优于LBP2.结论:LBP对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用可能与其特异性激活JNK MAPK信号转导通路相关,且其活性强弱与LBP分子量表现出较大的关联性.