人源性Notch 1胞内段真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的 构建人源性Notch 1胞内段(NICD)真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,并观察其在真核细胞中的表达.方法 通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人脑胶质母细胞瘤细胞系U251细胞中获得编码NICD的cDNA,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP;经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内NICD的表达.结果 构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,将其转染HeLa细胞72 h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内NICD的表达显著增高.结论 成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NICD,为研究Notch信号通路在人脑胶质细胞瘤发生发展中的作用机制奠定了基础.