大鼠催乳素腺瘤MMQ细胞株肿瘤干细胞样细胞的培养和鉴定

摘要

目的探索大鼠垂体催乳素腺瘤MMQ细胞株中肿瘤干细胞样细胞的体外培养条件,并观察其增殖、分化及种植成瘤的特点。方法采用含表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清培养液悬浮培养MMQ细胞,获得肿瘤干细胞样细胞球（简称细胞球）,行克隆培养,观察其增殖能力;应用流式细胞技术测定CD133阳性细胞比例,Western blot试验测定细胞球CDl33、巢蛋白（nestin）的表达,免疫荧光技术检测细胞球CD133、nestin、归巢细胞黏附分子（HCAM/CD44）、八聚体结合转录因子4（OCT4）、干细胞抗原1（SCA1）的表达,以及细胞球分化细胞的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经微管蛋白(β-tublinⅢ和S100蛋白的表达。取雌性裸鼠27只,随机分为细胞球种植组、MMQ细胞种植组和正常对照组,每组9只。皮下种植6周后,测量肿瘤体积及血清催乳素（PRL）水平,肿瘤组织切片行HE染色和免疫组化检测。结果在无血清培养液悬浮培养条件下,仅少数细胞能存活并形成细胞球,吹散后细胞能克隆增殖成球,细胞球中CD133阳性细胞比例为（1.10±0.17）%。细胞球上CD133、nestin、HCAM/CD44、OCT4和SCA1呈阳性表达;细胞球分化后,细胞阳性表达GFAP、β-tublinⅢ和S100蛋白。细胞球种植组成瘤体积为（1262.2±279.1）mm~3,MMQ细胞种植组为（495.9±158.9）mm~3,P＜0.05;细胞球种植组荷瘤裸鼠血清PRL[中位数（P25,P75）]为36.08（34.23,41.42）ng/ml,MMQ细胞种植组为21.51（20.39,22.98）ng/ml,均高于正常对照组的0.26（0.15,1.03）ng/ml,P＜0.05。肿瘤组织HE染色显示,与大鼠垂体腺瘤相似的特征;免疫组化染色显示,PRL和神经突触素（Syn）表达阳性。结论大鼠垂体催乳素腺瘤MMQ细胞株中存在少量具有肿瘤干细胞样细胞特性的细胞,并能在体外培养成功。