神经营养因子—3 cDNA的克隆以及在酿酒酵母中的分泌性表达

摘要

从原代培养人许旺细胞中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了编码带前导肽和成熟的ＮＴ－３两个ｃＤＮＡ片段，经ＤＮＡ序列测定表明其顺序与文献报道一致，将这两个ｃＤＮＡ片段克隆到大肠－酵经平穿梭质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵线产宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达，这两种ｃＤＮＡ片段的表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定，大小都在１５ｋｕ左右，说明带前导肽的ＮＴ－３在酵母细胞中