银染mRNA差异显示方法的条件优化

摘要

ｍＲＮＡ差异显示技术是分离差异表达基因的强有力工具，本工作旨在优化无同位素的银染差异显示方法。以总ＲＮＡ为模板，用锚定引物与随机引物的组合进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，ＰＣＲ扩增产物在变性的聚丙烯酰胺凝胶上电泳，用银染方法显示电泳ｃＤＮＡ条带，其结果是：（１）ＲＮＡ加入量为１～３μｇＲＴ－ＰＣＲ反应能扩增出较多的ｃＤＮＡ条带，而低于０．５μｇ时扩增条带数目较少，（２）在３６～４２℃的范围内，随着温度的增加