胶质瘤干细胞与胶质瘤非干细胞生物学特性的差异性研究

摘要

目的 探讨胶质瘤干细胞（GSC）与胶质瘤非干细胞（nGSC）在生物学特性及相关蛋白表达方面的差异。方法 体外培养GSC1、GSC2及nGSC1、nGSC2,培养2、4、6、8、10和12 d后采用CCK8法检测4种细胞的增殖能力；培养2 d后采用CCK8法检测细胞对替莫唑胺（TMZ）的敏感性；粘附实验检测细胞的粘附能力；Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力；明胶酶谱实验检测细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的活性；Western blotting、免疫荧光染色检测细胞Notchl、表皮生长因子受体（EGFR）蛋白的表达。结果 培养4、6、8、10和12 d时nGSC1细胞存活率均高于GSC1,nGSC2细胞存活率均高于GSC2,差异均有统计学意义（P＆0.05）；TMZ对GSC1、nGSC1和GSC2、nGSC2的半数抑制浓度（IC50）分别为（1536.0±17.67） μmol/L、（514.5±13.44） μmol/L,（2543.0±39.87） μmol/L、（889.6±17.43） μmol/L；GSC1粘附于细胞外纤维链接蛋白、胶原蛋白I的细胞数均多于nGSC1,GSC2粘附于纤维链接蛋白、胶原蛋白I的细胞数均多于nGSC2,差异均有统计学意义（P＆0.05）；GSC1迁移12、24 h的细胞数均多于nGSC1,GSC2迁移12、24 h的细胞数均多于nGSC2,差异均有统计学意义（P＆0.05）；GSC1侵袭24、36 h的细胞数多于nGSC1,GSC2侵袭24、36 h的细胞数多于nGSC2,差异均有统计学意义（P＆0.05）；GSC1分泌MMP-2的活性高于nGSC1,GSC2分泌MMP-2的活性高于nGSC2,差异均有统计学意义（P＆0.05）；Western blotting检测显示GSC1中EGFR/Notch1蛋白相对表达量低于nGSC1,GSC2中EGFR/Notch1蛋白相对表达量低于nGSC2,差异均有统计学意义（P＆0.05）；免疫荧光染色结果与Western blotting检测结果一致,EGFR蛋白在nGSC中强表达,在GSC中弱表达。Notch1蛋白在GSC中强表达,在nGSC中弱表达。结论 相对于高表达EGFR并具有较强增殖能力的nGSC,高表达Notch1的GSC分泌的MMP-2活性高,具有更强的粘附、迁移、侵袭能力,这可能是胶质瘤治疗抵抗和复发的重要原因。