抗乙酰胆碱受体单链抗体原核表达载体及表达菌株的构建

摘要

目的 将含有抗人乙酰胆碱受体(AChR)单链抗体基因的载体重新构建并建立表达菌株.方法 采用聚合酶链反应(PCR)从质粒pHEN1中克隆单链抗体scFv1929#全长基因, 将PCR产物再定向克隆至载体pET32a(+)的多克隆位点中, 并转入大肠杆菌BL21(D E3)plysS以构建表达菌株.结果 PCR产物约730 bp, 与预期一致, 重组阳性克隆菌株JM109+pET32a(+)-scFv1929#经菌液PCR可见730 bp处有特异性条带, 所提取质粒pET32a(+)-scFv1929#经PCR及酶切鉴定正确, 经测序后证实scFv1929#的核苷酸序列正确并正确地插入载体pET32a(+)的读码框内.将新构建载体转化大肠杆菌BL21(D E3)plysS以获得表达菌株. 结论 已成功地重新构建含有抗AChR单链抗体基因的载体并建立大肠杆菌表达菌株BL21(D E3)plysS+pET32a(+)-scFv1929#, 为今后表达抗AChR单链抗体scFv1929#融合蛋白打下基础.