RWD结构小泛素化增强子与缺氧诱导因子-1α在AtT-20细胞的表达

摘要

目的：研究RWD结构小泛素化增强子（RWD containing sumoylation enhancer，RSUME）调控缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor 1-alpha, HIF-1α）对AtT-20细胞侵袭的影响。方法通过氯化钴模拟小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞的缺氧环境，并应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测RSUME、HIF-1α的mRNA和蛋白水平的改变；然后运用HIF-1α小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）及阴性对照序列转染小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞，实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测RSUME的mRNA和蛋白水平的改变；运用RSUME siRNA及阴性对照序列转染小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞后，实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测HIF-1α的mRNA和蛋白水平的改变；并用Transwell及MTT法检测AtT-20细胞侵袭的改变。结果氯化钴作用AtT-20细胞后，细胞中RSUME的蛋白（P=0.003）和HIF-1α的蛋白（P=0.002）水平明显升高；HIF-1αsiRNA转染的AtT-20细胞中RSUME mRNA（P=0.162）及蛋白（P=0.668）水平表达无明显变化；RSUME siRNA转染的AtT-20细胞中HIF-1α蛋白水平表达明显降低（P＜0.001），而mRNA水平未见明显改变（P=0.136）；RSUME siRNA转染组AtT-20细胞侵袭率较RSUME阴性对照组及空白对照组低(侵袭抑制率=26.2%±8.4%)。结论缺氧可诱导RSUME的表达， RSUME可调控HIF-1α的蛋白水平的作用影响AtT-20细胞的侵袭。