RSUME与IκB/NF-κB在小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞中的表达及其意义

摘要

研究背景与目的：
　　垂体腺瘤是成人常见的神经系统肿瘤之一，大部分垂体腺瘤是良性肿瘤，对周围组织不具有侵袭破坏能力，但约43％垂体腺瘤因具有侵袭性导致手术难以完全切除或者切除难度增大，并且术后复发率较高。RWD结构小泛素化增强子（RWDcontainingsumoylationenhancer，RSUME）是近年来发现的一种在垂体腺瘤中高表达且可以调控小泛素化过程的因子。在缺氧等刺激因素下，可以诱导RSUME快速生成增加，RSUME与小泛素相关修饰因子-1（smallubiquitinrelatedmodifiers-1，SUMO-1）在泛素结合酶Ubc9作用下结合为RSUME-Ubc9-SUMO-1复合体，然后识别IκB上泛素结合位点，进而影响核转录因子κB抑制因子（inhibitorofnuclearfactorkappaB,IκB）稳定性及活性，进一步对核转录因子（nuclearfactorkappaB，NF-κB）作用，从而调节细胞增殖。本研究拟通过研究RSUME增强SUMO-1影响IκB/NF-κB通路在小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞中的表达及意义，阐述RSUME、IκB/NF-κB对垂体腺瘤侵袭性发展的分子机制，为垂体腺瘤治疗提供新的思考方向。
　　方法：
　　通过RSUME小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）转染以及氯化钴处理小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞，行实时荧光定量PCR（q-PCR）检测RSUME、IκB-α、NF-κB1的总mRNA水平的改变，WB（蛋白质印迹法）检测总蛋白RSUME，核蛋白IκB-α及NF-κB1水平的改变，流式细胞术检测细胞凋亡水平，并用Transwell检测垂体腺瘤侵袭能力的改变。
　　结果：
　　（1）不同浓度氯化钴模拟缺氧处理小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞后，RSUMEmRNA表达水平明显上调（p＜0.05）,IκB-αmRNA及NF-κB1mRNA表达无明显变化（p＞0.05）；RSUME、IκB-α蛋白表达水平明显上调，NF-κB1蛋白表达水平明显下调。
　　（2）应用RSUME小干扰siRNA转染小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞后，RSUMEsiRNA转染组的mRNA水平与RSUME阴性siRNA对照组及NC组相比明显下调（p＜0.05），IκB-αmRNA及NF-κB1mRNA的表达水平三组之间无明显变化（p＞0.05）；RSUMEsiRNA转染组与RSUME阴性siRNA组及NC组中RSUME、IκB-α蛋白水平相比明显下降（p＜0.05），而NF-κB1蛋白的表达水平也随着相应上升（p＜0.05）。
　　（3）与NC组及RSUME阴性siRNA转染组对比，Transwell侵袭实验中RSUMEsiRNA转染组抑制AtT-20细胞侵袭（p＜0.05）。
　　（4）流式细胞术检测RSUMEsiRNA转染组、RSUME阴性siRNA转染组、及NC组细胞凋亡发现有差异（p＜0.05）。
　　结论：
　　1、氯化钴可以诱导AtT-20细胞中RSUME上调，RSUME与IκB-α表达正相关，与NF-κB1表达负相关。
　　2、RSUME可以抑制IkB/NF-κB通路作用，促进小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞侵袭。
　　3、RSUME与小鼠垂体腺瘤AtT-20细胞侵袭性之间相关。