EP1受体通过激活p38 MAPK通路介导阿霉素诱导的足细胞损伤

摘要

目的探讨前列腺素E2受体1亚型（EP1）在阿霉素（ADR）诱导的足细胞损伤中的作用及其可能机制。方法 （1）动物实验:6～8周龄雄性Balb/c小鼠被随机分为4组:对照组;ADR组;EP1激动剂（17-phenyl PGE2）+ADR组;EP1拮抗剂（SC-19220）+ADR组。尾静脉注射ADR（10mg/kg）构建小鼠肾病综合征模型,分别给予EP1激动剂（1μg/g）和拮抗剂（25μg/g）。检测小鼠尿蛋白量、血生化、肾脏病理改变、电镜下足细胞改变以及足细胞相关蛋白的表达变化。（2）细胞实验:体外培养足细胞,分为4组:对照组;ADR组;EP1激动剂+ADR组;EP1拮抗剂+ADR组。CCK-8法检测足细胞增殖情况;ELISA法检测足细胞前列腺素E2（PGE2）含量;间接免疫荧光法检测足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP在足细胞中的定位;实时定量PCR法及Western印迹法检测足细胞相关蛋白mRNA及蛋白的表达;Western印迹法检测p38MAPK活性变化;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 （1）动物实验结果 :与对照组相比,ADR组小鼠出现明显蛋白尿、血生化及肾脏病理改变;与ADR组相比,EP1激动剂+ADR组尿蛋白量增多、血生化异常及肾脏病理改变加重,拮抗剂+ADR组上述改变减轻。免疫组化结果显示,ADR组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达与对照组相比显著降低,EP1激动剂可进一步抑制其表达,拮抗剂干预后上述改变得到改善（均P＜0.05）。电镜下观察ADR组足细胞足突增宽、融合,激动剂组足细胞损伤进一步加重,拮抗剂干预后足细胞损伤减轻。（2）细胞实验结果 :与对照组相比,ADR组足细胞中PGE2含量、环氧合酶2（COX2）mRNA及蛋白表达增加,nephrin、podocin、CD2AP mRNA及蛋白表达下降,p38 MAPK活性增加,足细胞凋亡显著增多（均P＜0.05）。EP1激动剂干预后上述改变加重（均P＜0.05）;拮抗剂可下调PGE2及COX2 mRNA及蛋白的表达,上调nephrin、podocin、CD2AP mRNA及蛋白表达,抑制p38 MAPK活性,抑制足细胞凋亡（均P＜0.05）。加入p38 MAPK抑制剂（10μmol/L）可以减轻EP1激动剂对足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达的抑制作用。结论 EP1受体可能通过激活p38 MAPK信号通路抑制足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP的表达,介导ADR诱导的足细胞损伤,抑制EP1受体对足细胞有保护作用。