登革2型病毒43株NS1基因重组质粒DNA的免疫原性及保护作用研究

摘要

目的研究以pcDNA3.1为载体的登革2型病毒43株(D2-43)NS1基因重组DNA的免疫原性及对登革病毒感染所致小鼠神经毒的免疫保护作用. 方法将纯化的pcDNA-NS1重组质粒DNA采用肌肉多点注射途径免疫3周龄BALB/c小鼠,剂量为每只100μg/次,检测了免疫鼠血清抗体滴度及特异性细胞毒作用.并以D2-43病毒脑内攻击6周龄BALB/c小鼠产生的神经毒症状为实验模型,对pcDNA-NS1的免疫保护作用进行了初步探讨. 结果用间接ELISA测得pcDNA-NS1免疫后抗体滴度为1∶800,在补体存在下,对D2-43病毒感染的BHK-21细胞特异性杀伤率可达到61.6%.由免疫的BALB/c小鼠脾制备的效应细胞在体外可特异性地杀伤D2-43感染的P-815细胞(H-2d).当效靶比(E/T)为20∶1时,pcDNA-NS1质粒免疫后的特异性CTL杀伤百分率为22.6%.将100 LD 50的D2-43病毒经脑内攻击BALB/c小鼠,结果表明免疫pcDNA-NS1组小鼠存活率最高(90.9%);与免疫 pcDNA3.1对照组比较,P值＜0.05. 结论 pcDNA-NS1质粒免疫BALB/c小鼠不仅可诱导体液免疫,还可诱导特异性细胞免疫.初步结果还显示,用含NS1基因的重组质粒DNA免疫的小鼠能免受致死剂量登革病毒的攻击,为登革热新型疫苗的研究奠定了基础.