登革3型病毒prME和NS1多基因重组质粒DNA免疫原性增强效果观察

摘要

DNA疫羁可以刺激动物产生体液免疫和细胞免疫.但是通常DNA疫苗的免疫原性较弱.将多种DNA疫苗混合后共同免疫将提供针对多种抗原表位的免疫应答,并有可能提高疫苗的免疫原性.该研究采用RT-PCR法获得了登革3型病毒的prME和NS1基因片段,分别将其插入真核表达载体pcDNA6/V<,5>·His-B,C,构建了两个真核表达重组质粒.将构建的重组质粒DNA分别转染真核细胞后用免疫荧光法可检测到外源蛋白的表达.然后将两种重组质粒DNA以混合及单独形式分别免疫BALB/C小鼠,免疫的小鼠可产生中和抗体和特异性CTL.在末次免疫后第33天,双质粒重组DNA组与prME重组质粒DNA组的中和抗体水平均可达到1:32.在末次免疫后第41天,当效靶比为40:1时,双质粒重组DNA免疫组的特异性CTL杀伤率为15％,而两个单质粒DNA组分别为10.9％和12.4％.在进一步对所构建的登革3型病毒prME和NS1基因重组质粒DNA及其混合质粒DNA的免疫保护作用进行评价中,由于无合适的小鼠模型,该研究通过采用观察免疫小鼠血清中中和抗体水平的变化进行评估.将不同的重组质粒DNA免疫小鼠后用登革3型病毒进行攻击,分别检测中和抗体的产生情况.在病毒攻击前3天,prME和NS1基因双质粒DNA免疫组与prME基因重组质粒DNA免疫组的中和抗体滴度均为1:4.在攻击病毒后第4和8天,双质粒DNA组的中和抗体滴度分别为1:8和1:4.在攻毒后第15和22天,双质粒DNA组中和抗体上升到1:8和1:16.说明双质粒DNA组诱发的中和抗体在攻毒后可再次升高.而单一的prME重组质粒DNA组在攻毒后第4天中和抗体水平从攻毒前的1:4上升到1:32.说明单一的prME重组质粒DNA可在攻毒后使小鼠诱生中和抗全的能力大幅提高.由于登革3型病毒的prME基因编码结构蛋白,其重组质粒DNA免疫小鼠可诱导产生中可抗体,而非结构蛋白NS1基因的重组质粒DNA主要诱导产生细胞免疫.上述结果表明,prME和NS1双质粒DNA免疫组诱导小鼠产生中和抗体的水平与单一prME重组质粒DNA的基本一致,而其诱导小鼠产生的细胞免疫反应略高于两个单一重组质粒DNA诱导产生的细胞免疫.该研究为进一步深入探讨登革新型DNA疫苗提供依据.

目录

文摘

英文文摘

前 言

第一部分我国登革3型病毒prME和NS1基因重组质粒DNA的构建与表达

一、登革3型病毒prME基因重组质粒DNA的构建与表达

二、登革3型病毒NS1基因重组质粒DNA的构建与表达

第二部分登革3型病毒prME和NS1多基因重组质粒DNA免疫原性增强效果观察

第三部分登革3型病毒prME和NS1多基因重组质粒DNA免疫保护效果的初步观察

结 论

参考文献

附 录

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致 谢