El Tor型霍乱弧菌口服活疫苗候选株IEM108的构建

摘要

目的构建能够诱导抗菌抗毒素免疫和抵抗CTXΦ转染的霍乱弧菌生物安全性口服活疫苗候选株. 方法以不产毒的El Tor型霍乱弧菌疫苗候选株IEM101为出发菌株,以管家基因thyA为选择压力,在IEM101的thyA基因缺失株IEM101-T中,通过质粒-染色体致死平衡系统表达霍乱毒素B亚单位基因ctxB和介导CTXΦ噬菌体免疫的rstR基因.在家兔模型中,通过检测血清杀弧菌抗体和抗CTB的IgG抗体来评价该新建疫苗候选株的免疫原性;以对家兔攻毒试验后肠段积液量来评价其保护力. 结果含ctxB、rstR和大肠杆菌来源的thyA基因的重组质粒在IEM101-T中稳定存在,GM1-ELISA 检测ctxB基因能够很好表达.动物试验表明,该新建疫苗候选株能刺激机体产生高滴度的血清杀弧菌抗体和抗CTB IgG抗体,能较好抵抗至少4μg纯品CT和不同毒株的攻击. 结论应用质粒-染色体致死平衡系统构建了能抵抗CTXΦ转染和稳定表达ctxB的生物安全性抗菌抗毒口服活疫苗候选株,其在家兔模型中有较好的免疫原性和保护力.