人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1的表达及病毒样颗粒的装配

摘要

目的在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)哈尔滨地区分离株的晚期蛋白L1,并分离纯化由L1蛋白在细胞中自主组装成的病毒样颗粒,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础.方法获得含有HPV16 L1基因的重组杆状病毒并使目的蛋白L1在昆虫细胞中表达;对重组杆状病毒的扩增条件及L1蛋白的表达水平进行优化;电镜下观察昆虫细胞中晚期蛋白装配成病毒样颗粒的情况,经氯化铯密度梯度纯化病毒样颗粒,并经Western blot进行验证.结果获得了稳定表达L1蛋白的重组杆状病毒;以MOI值为0.2感染昆虫细胞可获得较高滴度的重组病毒,以MOI值为10感染昆虫细胞可获得较高水平的L1蛋白表达;电镜下可观察到昆虫细胞核内直径为55nm的病毒样颗粒;病毒样颗粒可通过氯化铯密度梯度离心获得.结论获得人乳头瘤病毒哈尔滨地区分离株L1蛋白可在昆虫细胞中自主装配的病毒样颗粒并成功分离纯化.