湖南省铜绿假单胞菌四种外排泵在多重耐药菌株中表达的分布及作用

摘要

目的探讨湖南省多重耐药（multi-drug resistance,MDR）铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa,Pa）中4种外排泵表达的分布和作用,以及相关调控基因的突变情况。方法收集2008年湖南省临床首次分离非重复多重耐药Pa株40株,以外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺及4种药敏纸片进行外排泵表型初步筛选,PCR扩增膜融合蛋白基因及相关外排泵调控基因并测序;以18组非多重耐药菌株为对照研究分析Pa外排泵基因表达在多重耐药中的作用。结果表型筛选MDR组菌株MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM阳性率分别为45.0%（18/40）、30.0%（12/40）、42.5%（17/40）、12.5%（5/40）;RT-PCR显示mexA、mexC、mexE和mexX表达阳性率分别为100%（58/58）、22.5%（9/40）、45.0%（18/40）和22.5%（9/40）。Real-time PCR半定量分析菌株超表达mexA和mexX阳性率分别为55.0%（22/40）和22.5%（9/40）。非多重耐药组中,mexA与mexX real-time PCR超表达阳性率均为0（0/18）。mexC和mexE RT-PCR表达阳性率分别为11.1%（2/18）、38.9%（7/18）。两组相比,mexA与mexX超表达差异有统计学意义（P＜0.001,P=0.045）。随机挑选超表达mexA菌株Pa20出现mexR的164GTG→GAG、126Val→Glu替代;超表达mexX菌株Pa34出现mexZ的164GCG→GAG、55Ala→Glu。结论湖南省多重耐药Pa株大多存在主动外排的耐药机制,其耐药与外排基因Mex-AB-OprM和MexXY-OprM超表达有关。主动外排泵MexAB-OprM和MexXY-OprM超表达大多存在其调控基因突变。