3所综合性医院分离的多重耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的表达分析

摘要

目的 分析多重耐药铜绿假单胞菌(PA)外排泵MexAB-OprM的表达,并探讨MexAB-OprM高表达与调控基因mexR、nalC和nalD突变的关系.方法 利用肉汤稀释法进行头孢他啶、头孢哌酮舒巴坦、亚胺培南、环丙沙星、阿米卡星和氨曲南的敏感性试验,联合外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(PAβN)进行外排泵的表型筛选试验;在表型筛选为阳性的PA中随机挑选7株,实时荧光定量-PCR(RT-PCR)法检测膜融合蛋白基因mexA的相对表达量;PCR扩增调控基因mexR、nalC和nalD,将扩增结果测序比对.结果 耐环丙沙星、头孢他啶、氨曲南、头孢哌酮舒巴坦、亚胺培南和阿米卡星PA外排泵的表型筛选阳性率分别为96.8％、44.8％、41.4％、41.4％、40.0％、10.0％;以野生型铜绿假单胞菌(PAO1)为对照菌,mexA的相对表达量范围为1.56～10.03(2.29±0.60),属于外排泵的高表达;高表达菌株均发生mexR、nalC和nalD基因突变和氨基酸替换.结论 环丙沙星的耐药以外排泵耐药机制为主,调控基因mexR、nalC和nalD的碱基突变导致了外排泵MexAB-OprM高表达,外排泵的高表达导致了铜绿假单胞菌的耐药.