实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测bcl-2基因mRNA表达

摘要

目的建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测bcl-2基因mRNA表达.方法应用T-A克隆技术构建含bcl-2基因的载体作为标准模板,采用荧光Taq man方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测bcl-2反义核酸治疗前后人类Burkitt's淋巴瘤裸鼠模型中瘤细胞的bcl-2 mRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较.结果实时荧光定量RT-PCR检测bcl-2反义核酸治疗组的瘤细胞bcl-2 mRNA表达明显降低,而bcl-2无义核酸对照组及空白对照组的瘤细胞bcl-2 mRNA表达仍较高,且显示无义核酸对照组与空白对照组的bcl-2 mRNA表达水平相近.半定量RT-PCR结果显示bcl-2出现类似的变化趋势.结论所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测bcl-2 mRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确.