巢式聚合酶链反应-序列特异引物法用于单卵裂球HLA-A位点分型研究

摘要

目的评价巢式聚合酶链反应-序列特异引物法（polymerasechainreaction-sequencespecificprimer,PCR-SSP）用于人类种植前胚胎的单个卵裂球HLA-A位点分型的准确性和可靠性。方法通过扩增HLA-A第2外显子评价单卵裂球巢式第1轮扩增的成功率,用巢式PCR-SSP法进行单卵裂球HLA-A分型。结果从10个家系的体外受精剩余胚胎中获得120个卵裂球,巢式第1轮扩增平均成功率为86.7%,其中前期家系F1F5为78.2%,后期家系F6-F10为93.8%;对80个卵裂球进一步做SSP分型,其中11个卵裂球HLA-A第2外显子扩增失败,无分型结果,而69个卵裂球HLA-A第2外显子扩增成功,都获得分型结果。除6个卵裂球因亲本纯合无法判断是否发生缺失外,剩下63个卵裂球中,基因型与根据亲本预测的结果相符的有59个,占93.6%;显示缺少部分亲本等位基因的有3个,占4.8%;显示部分亲本等位基因重复的1个,占1.6%。结论在第1轮扩增成功的基础上,巢式PCR-SSP法用于单卵裂球HLA-A分型准确可靠,可用于临床上筛选与需要造血干细胞移植的患儿HLA型等同的胚胎。