一个家族性高胆固醇血症家系的低密度脂蛋白受体基因突变检测与功能分析

摘要

目的 检测一个家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)患者低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)的基因突变,并对淋巴细胞表面LDLR功能进行检测.方法 以一家系中4例临床诊断为FH患者的基因组DNA为模板,首先检测载脂蛋白B-100(apolipoprotein B-100,ApoB100)基因R3500Q突变,以排除家族性ApoB100缺陷症(familial defective apolipoprotein B-100,FDB).然后用降落PCR方法,扩增LDLR基因的启动子和外显子片段,用单链构象多态性方法进行分析,对可疑外显子的PCR产物进行T/A克隆,测序分析.同时,用人淋巴细胞与荧光探针DiI标记的低密度脂蛋白发生结合反应,再通过流式细胞仪检测,显示具有功能性LDLR的淋巴细胞比例.结果 该家系患者LDLR基因第10外显子均出现杂合突变,第462位密码子由TGG突变为TAG,导致在462位提前出现终止密码子(W462X).具有功能性LDLR的淋巴细胞占总淋巴细胞比例患者为63.7%,健康对照者为77.3%,患者淋巴细胞LDLR活性约为健康对照者的82.4%,出现一定程度的降低.结论 提示LDLR基因W462X突变可能是导致本FH家系患者患病的一个主要原因.