可溶性白细胞介素-6受体结合链免疫放射检测方法的建立及应用

摘要

目的建立一种可溶性白细胞介素-6受体结合链(IL-6Rα)免疫放射检测方法.方法采用B淋巴细胞杂交瘤技术获取分泌鼠抗人可溶性IL-6Rα单抗的杂交瘤细胞株;经体内诱生腹水法制备单抗;免疫亲合层吸法纯化单抗;用 125I标记单抗后,采用竞争抑制分析法对单抗识别的抗原表位进行鉴定,选择识别不同抗原表位的2株单抗H126和SI10分别作为包被单抗和检测单抗,建立双单抗夹心的可溶性IL-6Rα免疫放射检测方法.分析该检测方法与可溶性IL-6Rα相关的细胞因子白细胞介素-6(IL-6)及可溶性IL-6信号传导链(IL-6Rβ,也称gp130)的交叉反应性;采用加入-回收法对检测方法的准确性进行鉴定,并绘制标准工作曲线,然后测定正常人及多发性骨髓瘤患者血清中可溶性IL-6Rα的含量.结果建立的可溶性IL-6Rα免疫放射检测方法的灵敏度为10 ng/ml,具有良好线性关系的检测范围是10～400 ng/ml,与IL-6及可溶性gp130(sgp130)无交叉反应性,加入重组可溶性IL-6Rα的回收率在92%～108%之间.正常人血清中可溶性IL-6Rα的含量为(81.96±7.23)ng/ml,多发性骨髓瘤患者血清中可溶性IL-6Rα的含量为(237.58±70.96)ng/ml,明显高于正常对照组(P<0.01). 结论该检测方法能够对血液中可溶性IL-6Rα进行准确定量,在可溶性IL-6Rα的基础研究及临床相关性疾病的辅助诊断中具有重要的意义.