单细胞四重巢式荧光聚合酶链反应进行血友病A基因诊断和性别鉴定的研究

摘要

目的 建立快速有效检测血友病A基因诊断和性别鉴定的单细胞聚合酶链反应(PCR)方法.方法 联合6个与凝血因子Ⅷ(FⅧ)紧密连锁的STR位点(DXS15、DXS9901、G6PD、DXS1073、DXS1108和F8Civs13)通过多重荧光PCR进行正常人群多态性分析和血友病A家系基因诊断,从中选取杂合度和诊断率较高的STR位点联合性别位点牙釉蛋白基因(Amelogenin gene)建立单淋巴细胞多重巢式荧光PCR的检测方法.结果 选择了3个杂合度和诊断率较高的STR位点(F8Civs13、DXS1073和DXS15)联合性别位点建立了单细胞四重巢式荧光PCR的检测方法.Amelogenin、DXS15、F8Civs13和DXS1073在男性的单细胞扩增成功率分别为94.3%、91.4%、100%和100%,在女性为100%、97.1%、97.1%和97.1%.该女性的DXS1073和DXS15位点呈杂合子,均未发现等位基因脱失现象.扩增皆未发现假阳性和假阴性的情况.结论 建立的单细胞四重巢式荧光PCR方法快速有效,有望应用于临床血友病A非创伤性产前基因诊断.