EpCAM抗体偶联纳米磁珠阳性分离实体瘤外周血循环肿瘤细胞方法的建立

摘要

目的建立EpCAM抗体偶联纳米磁珠阳性分离上皮来源的实体瘤外周血CTC的方法（简称"磁珠分离法"）,探讨该方法分离CTC的灵敏度和应用意义。方法用7.5ml健康志愿者外周血裂解红细胞分别倍比稀释加入5、10、20、50、100个乳腺癌细胞系MCF7、食管癌细胞系KYSE70、胰腺癌细胞系BxPC-3及胃癌细胞系9811P,通过磁珠分离法富集癌细胞,荧光显微镜下检测体外加入癌细胞的同收率。然后,用磁珠分离法富集未治疗的30例食管癌（Ⅰ期+Ⅱ期6例、Ⅲ期+Ⅳ期24例）、35例乳腺癌（Ⅰ期+Ⅱ期15例、Ⅲ期+Ⅳ期20例）、30例胰腺癌（Ⅰ期+Ⅱ期5例、Ⅲ期+Ⅳ期25例）、33例胃癌患者（Ⅰ期+Ⅱ期13例、Ⅲ期+Ⅳ期20例）和30例慢性胃炎及30名健康志愿者的CTC,同时结合IF和HE染色鉴定各组的CTC。另外,用FISH分别检测分析食管癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌患者200个CTC中8号和20号染色体拷贝数水平。结果用4,6-二眯-2苯吲哚（DAPI）染色食管癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等4种癌细胞系并加入健康志愿者7.5ml外周血的组内试验中,荧光显微镜下计数4种癌细胞的组内的平均回收率分别为87%、87%、86%和88%;5种稀释梯度的细胞数在4种癌细胞系的组间的平均回收率分别是88%、85%、87%、88%和87%。在10~7的外周血白细胞中能富集到1个癌细胞。采用磁珠分离法从食管癌、乳腺癌、胰腺癌及胃癌患者中检出≥2个CTC的阳性率分别为50%（15/30）、63%（22/35）、70%（21/30）及61%（20/33）,健康志愿者和炎症患者均未检出CTC。食管癌、乳腺癌、胰腺癌组分别与健康对照组和炎症组比较,经精确概率法分析,差异均有统计学意义（P值均为0.000）。80%的食道癌、75%的乳腺癌、65%的胰腺癌和59%的胃癌患者CTC中均发生8号和20号染色体非整倍体改变。结论建立的磁珠分离法对富集分离实体瘤外周血CTC具有较好的分选灵敏度和准确性。食道癌、乳腺癌、胰腺癌和胃癌患者中的CTC多发生8号和20号染色体非整倍体改变。