抗CD133单链抗体/白喉毒素DAB389融合蛋白的基因构建、表达、纯化及鉴定

摘要

目的 构建抗CD133单链抗体(scFV)/白喉毒素DAB389融合蛋白,在大肠杆菌里表达,并鉴定及纯化.方法 采用PCR的方法,扩增融合基因DAB389-Linker-CD133 (scFV),并插入到原核表达载体pET28a中,构建了重组表达载体pET28a-DAB389-CD133,融合蛋白在BL21 (DE3)中表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定,通过Ni柱纯化目的蛋白,获得了纯度达95％的DAB389-Linker--CD133 (scFV)融合蛋白.Western blot鉴定蛋白活性.流式细胞仪检测能否与CD133抗原特异性结合.结果 扩增的片段与理论值一致,序列分析正确;纯化得到纯度为95％的重组蛋白.Western blot分析能特异性地与抗白喉抗体结合.流式细胞仪检测能与CD133抗原特异性结合.结论 成功构建了抗CD133单链抗体(scFV)/白喉毒素DAB389融合蛋白,具有结合抗原和免疫毒素双重活性,为进一步靶向治疗奠定了基础.