肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM的建立及耐药机制研究

摘要

目的建立人肝癌多药耐药细胞系并研究其耐药特性及机制.方法应用人肝癌细胞株HepG2,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法,建立多药耐药细胞系HepG2/ADM.相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(mdr)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平.结果HepG2/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对阿霉素的耐药性提高了89.38倍.流式细胞仪分析发现(45.5±5.1)%的HepG2/ADM细胞表面P-gp表达阳性,而对照细胞HepG2表达仅为(11.3±1.2)%,二者差异有显著性(P＜0.01);HepG2/ADM和HepG2细胞的MRP及GSH/GST表达无明显变化(P＞0.05).RT-PCR检测发现HepG2/ADM中MDR mRNA高表达.结论HepG2/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR mRNA表达升高.