细胞内氯通道4基因siRNA表达载体的构建及其沉默效应

摘要

目的 构建针对细胞内氯通道4(CLIC4)的短链干涉RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对CLIC4基因的干涉作用.方法 设计CLIC4靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接到pSilencer3.1-H1载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体转染法转染大鼠神经胶质瘤细胞C6,通过RT-PCR检测CLIC4基因表达水平的变化.结果 酶切鉴定与DNA测序分析证明CLIC4基因的siRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明CLIC4基因的表达水平明显降低.结论 成功地构建了针对CLIC4基因的siRNA载体,转染细胞后可显著抑制CLIC4基因表达.