三重qPCR法快速检测肺炎克雷伯菌的方法建立与应用

摘要

目的 建立三重qPCR法(实时荧光定量)快速检测肺炎克雷伯氏菌rcsA和23s RNA基因,期以快速精准诊断呼吸道肺炎克雷伯氏菌感染,为早期精准治疗提供依据.方法 根据GenBank公布的肺炎克雷伯氏菌rcsA和23s RNA基因序列选择保守区设计测序引物,高保真扩增东莞樟木头医院分离到的95株肺炎克雷伯氏菌rcsA和23s RNA基因,经测序比对后,避开变异区和突变点分别设计检测引物和探针,建立三重qPCR方法直接检测临床呼吸道样本,并与培养及测序法比较,验证其诊断灵敏度和特异性等性能指标.结果 三重qPCR法检测肺炎克雷伯氏菌rcsA和23s RNA基因,其检测下限低至2 cfu/PCR,检测灵敏度98.9％(94/95),检测特异性97.9％(93/95);诊断灵敏度98.6％(424/430),诊断特异性98.8％(2295/2324);从样品处理到报告结果≤1.2h.结论 该方法简便、快速、灵敏度高、特异性好,可实现呼吸道肺炎克雷伯氏菌感染的快速与精准诊断,为早期精准治疗赢得时间.