硫化氢对肠缺血/再灌注损伤大鼠核转录因子-κB及下游基因表达的影响

摘要

目的 探讨硫化氢(H2S)对肠缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠核转录因子-κB (NF-κB)及下游基因表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、I/R组,I/R+硫氢化钠(NaHS)组(NaHS组),每组8只.NaHS组在再灌注前10 min静脉注射(静注)100 μmol/kg NaHS后按1 mg· kg-1·h-1持续静注直到再灌注2h,Sham组和I/R组静注等体积的生理盐水.用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)观察回肠上皮细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI),蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测回肠组织NF-κB蛋白及NF-KB磷酸化(pNF-κB)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血白细胞介素(IL-1、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,敏感硫电极法测定血H2S水平,动态浊度法测定血内毒素水平.采用直线相关分析法分析pNF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1与H2S、AI、内毒素及内毒素、AI与H2S的相关性.结果 Sham组未见凋亡细胞,I/R组可见较多的棕褐色凋亡回肠黏膜腺上皮细胞,AI明显增加[(39.62±4.50)％比(4.30±1.09)％].NaHS组可见较稀疏的棕褐色凋亡回肠黏膜腺上皮细胞,AI较I/R组明显降低[(24.41±2.76)％比(39.62±4.50)％,P＜0.01].与Sham组比较,I/R组NF-κB蛋白表达降低(灰度值:0.82±0.08比0.87±0.07),pNF-KB(灰度值:0.82±0.07比0.15±0.02)、TNF-α(ng/L:49.02±1.62比4.08±0.94)、IL-6 (ng/L:437.08±12.43比227.97±12.92)、IL-1(96.12±12.35比47.97±9.68)、内毒素均明显升高(U/L:0.710±0.071比0.302±0.069),H2S明显降低(μmol/L:24.38±2.69比42.57±7.18);与I/R组比较,NaHS组TNF-α(ng/L:39.27±1.54)、IL-6(ng/L:349.43±17.20)、IL-1 (ng/L:67.38±14.57)、pNF-κB (0.78±0.09)、内毒素(U/L:0.558±0.074)均降低,NF-κB蛋白表达(灰度值:0.84±0.06)和H2S水平升高(μmol/L:35.27±3.14).pNF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1与H2S呈负相关(r值分别为-0.637、-0.778、-0.819、-0.675,均P＜0.01),与AI呈正相关(r值分别为0.672、0.643、0.759、0.556,均P＜0.01),与内毒素呈正相关(r值分别为0.680、0.580、0.720、0.560,均P＜0.01),内毒素、AI与H2S呈负相关(r值分别为-0.790、-0.843,均P＜0.01).结论 提示H2S能降低TNF-α、IL-6、IL-1及pNF-κB水平,减轻肠I/R损伤大鼠回肠黏膜上皮细胞凋亡、内毒素血症,对大鼠小肠I/R损伤起保护作用.