淋病奈瑟球菌表面蛋白A基因疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答

摘要

目的构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A（NspA）基因疫苗,并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3.1（+）中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1（+）/NspA,并经PCR、双酶切及测序鉴定。反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学法分别检测NspA基因转染细胞后mRNA和蛋白的表达。以pcDNA3.1（+）/NspA重组质粒免疫45只雄性BALB/c小鼠,试管凝集法检测免疫小鼠抗体滴度,EIASA检测IFN-γ水平,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测脾淋巴细胞增殖。提取接种部位股四头肌总DNA,PCR检测BALB/c小鼠肌细胞内NspA基因。结果成功构建pcDNA3.1（+）/NspA基因疫苗,能在真核细胞中转录和表达。pcDNA3.1（+）/NspA免疫组的抗体滴度达1:640,pcDNA3.1（+）和PBS免疫组均无特异性抗体检出。空载体pcDNA3.1（+）组IFN-γ为（23.79±11.85）pg/mL,pcDNA3.1（+）/ NspA免疫组为（169.71±30.52）pg/mL（P＜0.01）;脾淋巴细胞增殖的刺激指数（SI）分别为1.05±0.30和1.94±0.74（P＜0.01）。并证实NspA基因可在小鼠肌细胞中稳定存在。结论构建淋病奈瑟球菌NspA基因疫苗,将其免疫BALB/c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答,为进一步用于淋病预防奠定了基础。