小鼠巨细胞病毒感染鼠胚胎成纤维细胞对共培养调节性T细胞增殖和活化的影响

摘要

目的研究小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对共培养体系中调节性T细胞（Treg）的诱导作用和Treg在抗病毒免疫中的调节作用。方法建立小鼠T淋巴细胞与感染CMV的同系小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）体外共培养的细胞模型。蚀斑法检测共培养上清液中MCMV负荷量;细胞计数法分析体系中T淋巴细胞的扩增;流式细胞术检测共培养体系中CD4+CD25+Treg细胞比例,Western印迹法检测T淋巴细胞中Foxp3蛋白表达强度;RT-PCR法检测MEF中转化生长因子（TGF）-βmRNA表达水平;双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β蛋白表达水平。组间差异采用单因素方差分析。结果T淋巴细胞与MCMV感染的MEF共培养1 d和3 d后,培养上清液中病毒负荷量较对照组显著减少;但是共培养6 d后,T淋巴细胞的免疫保护作用消失,病毒量为（5.58±0.67）×10~5 PFU/mL,与感染对照组的（6.05±0.34）×10~5 PFU/mL比较,差异无统计学意义。CMV感染3 d后,T淋巴细胞数由感染前的（2.02±0.05）×10~6/mL增至（2.25±0.13）×10~6/mL（P＜0.05）;但继续培养至6 d时,T淋巴细胞数为（2.08±0.14）×10~6/mL,与3 d时比较,差异无统计学意义。CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例和Foxp3蛋白表达变化相似,均随MCMV感染时间延长而增加,在感染后6 d分别增至对照组的2倍和3倍;TGF-β在MEF中的基因转录水平（A值）由感染前的1.09±0.13增至感染3 d后的3.15±0.54,共培养上清液中的蛋白表达强度在感染后3 d增至（3.85±0.32）μg/L,与感染前的（1.74±0.14）μg/L比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论随感染时间延长,MCMV可能通过促进TGF-β表达等多种途径诱导Treg增殖活化。