敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响

摘要

目的:探讨敲除ABRO1对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)LPS/TLR4通路活化的影响.方法:分离培养ABRO1敲除(KO)及野生型(WT)MEF细胞;采用CBA流式细胞术检测LPS诱导后ABRO1 KO与WT MEF细胞分泌IL-6的水平;采用Western blot法确认其NF-κB信号通路以及MAPK信号通路的活化;采用qPCR检测IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表达;采用荧光素酶报告基因检测NF-κB的转录活性.结果:CBA流式结果显示,10 ng/ml、100 ng/ml和1μg/ml 3种不同剂量的LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞分泌IL-6的水平差异无统计学意义.qPCR检测显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA水平差异无统计学意义.Western blot结果显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞的NF-κB信号通路以及MAPK信号通路活化差异无统计学意义.荧光素酶报告基因检测结果显示,1μg/ml LPS诱导ABRO1 KO与WT MEF细胞NF-κB报告基因活性差异无统计学意义.结论:敲除ABRO1不影响MEF细胞LPS/TLR4信号通路活化.