液相色谱串联质谱法测定人血浆中多黏菌素E1、E2浓度

摘要

目的建立液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血浆中多黏菌素E1、E2浓度。方法采用固相萃取法处理样品。采用Waters UPLC-API4000QTRAP进行测定,色谱柱采用Phenomenex Kinetex XB-C18柱(100 mm×2.1 mm I.D.,2.6μm),以0.1%甲酸溶液∶乙腈-甲醇(体积比1∶1)为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,分析时间为3.5 min。多黏菌素E及内标多黏菌素B1的离子对分别为多黏菌素E1 m/z 390.7→101.3、多黏菌素E2 m/z 386.0→101.2、多黏菌素B1 m/z 402.3→101.2。结果多黏菌素E1和E2的分离测定不受血浆中内源性物质影响。多黏菌素E1浓度在0.0140~2.79 mg/L范围内线性关系良好,批内和批间精密度分别为2.7%~10.2%和2.5%~9.0%,批间准确度偏差为-4.5%~2.2%,内标归一化基质效应因子为94.8%~102.3%;多黏菌素E2浓度在0.0234~4.68 mg/L范围内线性关系良好,批内和批间精密度分别为2.8%~7.5%和2.9%~5.3%,批间准确度偏差为-4.8%~4.3%,内标归一化基质效应因子为93.1%~100.1%。血浆样品在-20℃存放3 d、-70℃存放71 d、反复冻融3次、室温放置18 h及制备后样品4℃放置48 h均稳定。结论建立了一种灵敏度高、分析时间短、选择性强的LC-MS/MS法,用于人血浆中多黏菌素E主要成分E1和E2的浓度测定,方法学验证结果满足生物样品定量分析方法验证指导原则的分析要求。该方法可为多黏菌素E临床药动学研究提供可靠检测方法。