TWIST1基因通过调节mTOR信号通路对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖凋亡的影响

摘要

目的:研究TWIST1基因对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡的影响以及mTOR信号通路的调控作用.方法:构建sh-TWIST1质粒(sh-TWIST1)和阴性对照质粒(shRNA),利用Lipofectamine 3000转染试剂分别将构建好的两种质粒转染至口腔鳞癌Tca8113细胞中,以只加入转染试剂的Tca8113细胞作为空白对照(Control).QRT-PCR法检测Tca8113细胞中TWIST1 mRNA水平;CCK-8法检测TWIST1对Tca8113细胞活力的影响;Edu染色法检测TWIST1对Tca8113细胞增殖的影响;TUNEL染色法检测TWIST1对Tca8113细胞凋亡的影响;ELISA法检测TWIST1对Tca8113细胞中Beclin1、LC3水平的影响;Western blot法检测TWIST1对Tca8113细胞中p-mTOR和P-P70S6K蛋白表达情况的影响.结果:与阴性对照组和空白对照组相比,sh-TWIST1质粒组Tca8113细胞中TWIST1 mRNA水平下降,细胞活力和增殖能力明显提高,其凋亡能力随之下降;Tca8113细胞中Beclin1水平下降、LC3水平升高;且p-mTOR和P-P70S6K蛋白升高;而阴性对照组与空白对照组之间无差异.结论:TWIST1沉默后过度激活Tca8113细胞自噬反应,导致Tca8113细胞增殖,并抑制凋亡,其机制可能与激活mTOR信号通路有关.